斷血流皂苷微球化的方法主要有噴霧干燥法、復(fù)凝聚法和單凝聚法，采用不同方法所得產(chǎn)品的外觀形態(tài)、包封率、載藥量和生產(chǎn)效率也不一樣。噴霧干燥法具有生產(chǎn)效率高，操作控制方便，干燥時間短的特點，適用于連續(xù)化的工業(yè)生產(chǎn)，故本實驗采用該法進行制備微球。
噴霧干燥法是流化技術(shù)用于干燥的方法，能直接將溶液、乳狀液、混懸液等干燥成顆?；蚍勰＝陙?，國內(nèi)外應(yīng)用噴霧干燥法制備微球已有大量文獻報道，它可以直接將藥物與囊材的混合液分散成霧滴并迅速蒸發(fā)形成微球，具有干燥時間短、速率高、產(chǎn)品溶解性和分散性良好、純度高、易于工業(yè)化生產(chǎn)等諸多優(yōu)點。
斷血流為唇形科植物蔭風(fēng)輪Clinopodiumpolycephalurn(Vaniot)C.Y.Wu et Hsuan ex Hsuan或風(fēng)輪菜C.chinese(Benth.)O.Kuntze的地上部分，為常用的婦科止血藥之一，其發(fā)揮藥效的主要成分為皂苷(斷血流皂苷)、黃酮類化合物。因斷血流皂苷對胃黏膜有較大的刺激性，為了提高其藥效并降低副作用，將其制成微球。故本研究以丙烯酸樹脂Ⅱ為囊材、微粉硅膠為抗黏劑、甘油為增塑劑、95%乙醇為溶劑，采用噴霧干燥法制備斷血流皂苷微球，以外觀形態(tài)、載藥量、包封率為指標(biāo)，對進風(fēng)溫度、進樣速度、增塑劑種類、藥物與囊材比例等因素進行考察，優(yōu)化工藝。
1 材料
TG328B型分析量天平(上海天平儀器廠)，BP211D型電子天平(德國賽多利斯)，日本島津LC-10ATVP型高效液相色譜儀(包括DAD檢測器)，Buchi-290小型噴霧干燥器(上海高和生物工程有限公司)，XL30ESEM型掃描電鏡(Philips)，斷血流皂苷A對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號110782-200301)，丙烯酸樹脂Ⅱ，微粉硅膠(藥用級，上海醫(yī)藥工業(yè)研究院)，甘油(藥用級)。
2 方法與結(jié)果
2.1 微球的制備
稱取一定量的囊材，用95%乙醇溶解并配成不同濃度，備用。將斷血流皂苷溶于囊材溶液中，皂苷和囊材按一定比例配成待噴液，加入增塑劑適量，充分?jǐn)噭颍偌尤肟桂┻m量，攪勻后進行噴霧干燥。
2.2 評價指標(biāo)
采用電子掃描觀察微球的外觀特征，并量取粒徑范圍。在視野中取微球數(shù)目不少于500粒為一樣本，以一定范圍內(nèi)的微球數(shù)目除以總數(shù)得其頻率，以頻率對相應(yīng)粒徑作直方圖。微球以圓球形，無黏連，粒徑在10～30μm為佳。載藥量指每克微球中的含藥量。載藥量越高，實際服用劑量越小。包封率指微球中實際含藥量占載藥量的百分比。包封率越高，表明藥物包封程度越好。
2.3 微球的形態(tài)及粒徑分布
采用XL30ESEM型掃描電鏡觀察得大部分微球為圓球形，表面光滑，無黏連，粒徑約在10～30μm，約占總微球數(shù)的63%。外觀形態(tài)見圖1，粒徑分布見圖2。
2.4 微球中載藥量和包封率的測定
2.4.1 斷血流皂苷A的HPLC測定
2.4.1.1 色譜條件
Hypersil ODS-C18色譜柱(4.6mm×250 mm，5μm)，流動相甲醇-水(80∶20)，檢測波長250 nm，流速1.0 mL·min-1。
2.4.1.2 方法學(xué)考察
取0.051 4 g·L-1的斷血流皂苷A對照品溶液，分別進樣1，5，8，10，15，20，30μL。按2.4.1.1的色譜條件進行測定，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程Y=2×106X+9×102(r=0.999 9)，斷血流皂苷A在0.051 4～1.542μg進樣量與峰面積線性關(guān)良好系。
取同一斷血流皂苷A對照品溶液，連續(xù)測定6次，RSD 0.32%，表明具有良好的精密度。
精密稱取斷血流皂苷A對照品2.00，3.00，4.00 mg，按處方量加入輔料，用無水乙醇溶解，配成高、中、低3種不同質(zhì)量濃度溶液，然后按2.4.1.1的色譜條件進行測定，得加樣回收率分別為102.53%，97.65%，104.00%。
2.4.2 微球載藥量的測定
稱取微球約500 mg置25 mL量瓶中，加入蒸餾水4 mL，浸泡1 h破球，用無水乙醇定容。超聲10 min后靜置1 h，搖勻后取適量2 500 r·min-1離心10 min，精密吸取上清液2mL，置5 mL量瓶中，用無水乙醇定容，備用。按2.4.1.1項下的色譜條件測定微球中斷血流皂苷A含量。圖3為空白微球與載藥微球的HPLC，可見輔料對藥物的測定無干擾。根據(jù)載藥量=(微球總藥量/微球總量)×100%，計算得微球平均載藥量為29.57%(n=3)。
2.4.3 包封率的計算
稱取微球約500 mg置10mL具塞試管中，精密加入蒸餾水2 mL，搖勻，于2 500 r·min-1超聲10 min，在沉淀物中再精密加入蒸餾水2 mL，重復(fù)操作3次，洗去游離藥物。在沉淀物中精密加入無水乙醇4 mL，浸泡20 min破球，備用。按2.4.1.1項下的色譜條件進樣測定，計算得微球平均包封率為87.6%。
包封率=微球包封的藥物量/微球載有的藥物量×100%
2.5 影響因素
2.5.1 進風(fēng)溫度
分別考察進風(fēng)溫度為70，80，90，105℃時制得的微球外觀。結(jié)果表明，進風(fēng)溫度過低，液滴未完全干燥便粘在干燥腔壁上，大大降低粉末收率，且極易堵塞噴嘴，造成噴霧中斷。進風(fēng)溫度過高，液滴表面溶劑快速揮發(fā)，球內(nèi)外溫度尚未平衡時便形成硬球殼，殘余溶劑包于球內(nèi)，進一步的快速揮發(fā)可使球殼破裂。因此選擇進風(fēng)溫度為90℃。
2.5.2 進樣速度
進樣速度快慢會影響微球在干燥室中的干燥過程。選擇高、中、低3個不同進樣速度進樣，制得微球，考察不同進樣速度對微球成型的影響，見表1。結(jié)果表明，進樣速度越大，粒徑越小。綜合考慮后選擇進樣速度為2.5 mL·min-1。
2.5.3 增塑劑種類
分別考察以鄰苯二甲酸二甲酯、蓖麻油、甘油作為增塑劑的微球外觀。結(jié)果表明，前兩者所得微球表面粗糙，而甘油作增塑劑所得微球表面較光滑，略有粗糙。因此，選擇甘油為增塑劑。
2.5.4 藥物與囊材比例
分別考察斷血流皂苷與囊材比例為1∶2，1∶3，1∶4，1∶6，1∶8時制得的微球質(zhì)量，結(jié)果見表2。隨著藥物與囊材比例的遞增，平均粒徑和包封率逐漸增加，載藥量呈遞減趨勢。綜合考慮，選擇藥物與囊材比例為1∶4。
2.6 驗證實驗
按2.5項下優(yōu)選條件，在進風(fēng)溫度90℃、進樣速度2.5 mL·min-1、甘油為增塑劑、藥物與囊材比例1∶4條件下制得斷血流皂苷微球，共3批。所得3批微球的外觀形態(tài)大部分為圓球形、表面光滑、無黏連，粒徑在10～30μm的微球約占總數(shù)的62%，平均粒徑為(21.3±4.5)μm;載藥量依次為54.69，53.54，57.78 mg·g-1;包封率分別為96.98%，91.43%，94.01%。
3 討論
有報道認(rèn)為出風(fēng)溫度是主要影響因素，但從實驗過程來看，出風(fēng)溫度同時受到加料速度、旋風(fēng)分離氣壓差、進風(fēng)溫度、物料性質(zhì)等多方面的影響，故在設(shè)計實驗時未把出風(fēng)溫度作為因素考察，而重點考察了進風(fēng)溫度。進風(fēng)溫度低于70℃，液滴未完全干燥易黏壁降低收率，同時極易引起噴嘴堵塞。而溫度太高易引起球殼破裂，降低包封率，故進風(fēng)溫度的選擇對微球成型尤為重要。
